A toxicologia reguladora tem enfatizado sempre mais a avaliação dos riscos que apresentam as substâncias químicas sobre a saude pública e ambiental, para o qual realiza ensaios com animais. Devido à pressão pública e dos cientísta, existe uma tendência crescente de se aplicar este princípio dos tres R na pesquisa com animais, fato que se manifesta nas próprias legislações dos países. Tudo isto levou para a pesquisa, métodos alternativos em relação aos tradicionais. Nesta revisão são apresentados os principais métodos alternativos como objetivo de substituir os animais de laboratório, reduzir seu número ou aperfeiçoar as técnicas utilizadas nos ensaios toxicológicos obrigatórios antes de se colocar no mercado novos produtos.